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发布于：2024-10-22T09:52:15
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想知道质粒转染细胞实验中，内毒素是如何杀死你心爱的胞胞的？想减少胞胞死亡率？快来一文get新知识吧！
Part 1 内毒素是什么？
内毒素，是革兰阴性细菌细胞壁的组成部分，主要化学成分是脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）。它通过与宿主细胞上的受体结合，激活一系列复杂的信号传导途径。这些信号传导通常涉及多种蛋白和酶，如MyD88、IRAK（白介素1受体相关激酶）和TRAF（肿瘤坏死因子受体相关因子）等，信号传导的激活导致细胞内多种炎症相关基因的表达增加，从而释放包括肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）等促炎细胞因子。这些细胞因子进一步放大炎症反应，并吸引免疫细胞如中性粒细胞和巨噬细胞到炎症部位，引发从局部炎症到全身性免疫反应的多种生物学效应，最终可能导致细胞损伤甚至死亡。
Part 2 内毒素会如何霍霍你的实验
质粒提取中减少内毒素，可以有效减少质粒转染实验中对细胞的损伤。
1）产生细胞毒性：细胞培养或动物实验中，内毒素具有很强的细胞毒性，引起免疫反应，导致细胞凋亡或坏死；
2）干扰免疫反应：在免疫学实验中，内毒素能够诱导机体产生强烈的炎症反应，导致体内炎症因子的释放，影响免疫功能研究；
3）影响蛋白质稳定表达：在蛋白质纯化或酶活性测定等实验中，内毒素的干扰可能会影响蛋白质表达的稳定性和活性；
4）其他影响：内毒素还可能影响PCR扩增、酶活性测定、细胞培养等实验结果的可靠性和准确性。
Part 3 如何消除内毒素
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去内毒素方法 |
原理简介 |
优点 |
缺点 |
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过滤柱法 |
内毒素为脂多糖分子，与核酸具有分子量的差异，利用分子筛原理过滤除去内毒素分子。 |
简单易行，操作方便；有效地分离内毒素分子；适用于大规模样品处理。 |
可能损失一部分目标分子；需要选择合适的膜孔径。 |
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内清剂法 |
内毒素分子可与表面活性剂通过疏水作用形成胶束结构，冷热交替使得内毒素分子被包裹析出沉淀，达到去除效果。 |
具有高度选择性，可以特异性地结合内毒素。 |
流程复杂，需冷热交替处理。 |
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新型结合介质 |
利用特殊滤膜对特定核酸的选择性并在特殊缓冲液作用下针对性结合质粒，而不结合内毒素分子达到去除内毒素。 |
流程简便，创新性高效；能够针对内毒素进行特定的清除。 |
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阴离子交换柱法 |
阴离子交换柱包含有带正电荷的介质，通常是通过化学修饰的树脂或珠子。这些介质能够与带负电荷的分子（如质粒DNA和内毒素）发生相互作用，通过调整柱上环境条件，逐步分离质粒DNA和内毒素。 |
具有高度选择性，特异性结合和去除内毒素；操作简单，适用于大规模提取。 |
整体流程耗时较长 |
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漂洗法 |
特殊物质处理的漂洗液与内毒素分子等杂质相溶，通过漂洗除去内毒素。 |
流程简便快速 |
内毒素残留高 |
Vazyme最新推出整套无内毒素质粒提取系列产品，在传统内毒素去除技术的基础上，进行了创新与优化。特殊吸附柱和精心研制的缓冲溶液，通过选择性吸附的方式与质粒结合，再配合专用的漂洗液，形成多重保障机制，大幅提高了内毒素的去除效率。
除了科技我们还有狠活，这一系列产品的设计充分考虑实际操作体验，将内毒素去除步骤与上柱结合步骤二合一，只需一轮过柱，即可完成上柱。同时，我们优化了裂解液配方，添加颜色指示剂，不仅加强裂解效率，通过清晰的颜色指示变化，可以确保裂解与中和效率，有利于絮状物杂质沉淀去除完全，便于上清更好吸出。
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无内毒素质粒小中(DC204)和大提(DC222)试剂盒新品热销中 |
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产品货号 |
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产品优势 |
快速高效 |
上柱+去内毒单柱设计 减少离心操作 |
超大柱容，不漏液，操作快 |
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简便直观 |
清晰的颜色指示变化，便于判断操作进程，小白快速上手，确保裂解中和效率，保障絮状物沉淀完全，上清易吸出。 |
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价格 |
新客新品“惊喜价” |
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产量 |
50 - 150 ug |
1 - 2.5 mg |
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